תשובה:
כדי לטהר את חלבונים חלק …
הסבר:
אם אתה מטהר (לעתים קרובות ספציפי) חלבון, תצטרך להיפטר כמו זבל כמו שאתה יכול זה יכול להיות קשור אליהם.
זה תלוי במידה שבה חלבון אתה אחרי, אבל בדרך כלל זה רעיון טוב, במיוחד ב הכנה טיהור, להיפטר כמו זיהומים רבים ככל האפשר.
1:
כמו חלבונים הם בדרך כלל גדולים, וכתוצאה מכך יופיעו להקות התחתון של החלק (ultracentrifuged) שלך, אתה רוצה להיפטר מכל חומצות גרעין, במיוחד אם החלב שאתה puryfying חששות אוהב של Pol1, הפוך transcriptase או כל אנזים אחר המעורב בשכפול / תמלול / תרגום …
אתה יכול להפריד בין חומצות גרעין הנוכחי המדגם באמצעות DNAse: זה יהיה לחלוטין hydrolyse DNA לחלקים המרכיבים שלה.
חשוב לך, ישנם שונים של DNAse, כל שונים במנגנון שלהם ואת הספציפיות עבור המצע שלהם. בהתאם DNAse בשימוש, זה יכול להראות גם Endo- או Exo- nuclease פעילות …
יותר מכך, RNAse הוא מתאים יותר, כמו רנ"א הוא בדרך כלל יותר בטווח ציפה / שבריר של חלבונים, והוא יכול להיות קשורה לחלבון.
2:
Lysozyme: אנזים שיש לו לפחות שתי פונקציות:
זה deglycosylates אנזימים: רוב החלבונים שנשאו בזרם הדם הם Glycosylated: יש להם כמה מולקולות סוכר המצורפת אליהם. Lysozyme תסיר את שאריות הסוכר.
כמו כן יש את היכולת לשבור את קיר התא של חיידקים גראם חיובי, גורם להם ליסה. (אם אתה רוצה לטהר חלבון חיידקים חיוביים גרם)
כל מוצרים מושפל, או חומצה גרעין או פסולת סוכר, יופיע בחלק העליון של שברים של צינור צנטריפוגה בשל "מצית" שלהם ציפה ….
מהן דוגמאות של שיטות טיהור חלבון?
משקעים דיאליזה סינון קרום אם אתה יודע את הנקודה isoelectric של חלבון אתה יכול לזרז ולסנן או צנטריפוגה את חלק החלבון על ידי התאמת pH. חלבונים הם מולקולות גדולות למדי דיאליזה או סינון הממברנה ניתן להשתמש כדי להסיר זיהומים כי יהיה בקלות לעבור את הנקבוביות של קרום תוך שמירה על חלק חלבון.
לבנים אדומות ואפורות שימשו להריסת קיר דקורטיבי. מספר לבנים אדומות היה 5 ומספר לבנים אפורות היו 2. היו 224 לבנים בשימוש בכל. כמה לבנים אדומות היו בשימוש?
160 לבנים אדומות. נראה כי עבור כל 5 לבנים אדומות אחד משתמש 2 לבנים אפורות. לפיכך עבור כל 2 + 5 = 7 לבנים יש 5 לבנים אדומות 2 לבנים על כל לבנים יש 5/7 אדום לבנים 2/2 אפור. מכאן אם 224 לבנים יש לנו 224 × 5/7 = לבטל 2 × 5 × = = 160 לבנים אדומות ו 224 × 2/7 = ביטול224 ^ 32 × 2 = 64 לבנים אפורות.
למה דטרגנטים נדרש לחלץ חלבונים ממברנה אינטגרלי, אבל לא חלבונים קרום הפריפריאלית?
חלבונים חיצוניים או פריפריאליים מוחזקים בחופשיות בקרום, הסרתם קלה. הם יכולים להיות מוסר פשוט על ידי שינוי ה- pH. חלבונים פנימיים מוטמעים עמוק בתוך הממברנה, ולכן עבור שלהם isloation דטרגנטים נחוצים.