תשובה:
- אנזים הגבלה הוא כלי מרכזי של דנ"א רקומביננטי technolog
הסבר:
- כל אנזימי ההגבלה בודקים את מולקולת הדנ"א בסדרה של רצף הכרה ספציפי. ברגע שהוא מקבל רצף זיהוי ספציפי, הוא נקשר לאתר וחתכים כל אחד משני גדילי סליל כפול בנקודות ספציפיות על ידי הידרוליזה של קשרי פוספודיסטר.
אנזימי הגבלה נקראים כמספריים המולקולריים
מה הפונקציה של אנזימי הגבלה?
אנזימי הגבלה נמצאים חיידקים archaea ולספק מנגנון הגנה נגד וירוסים פולשים. אנזימי הגבלה הם אנזימים כי לחתוך DNA ליד או ליד רצפים ספציפיים נוקליאוטידים הכרה הידועה בשם אתרי הגבלה. אנזימים הגבלה מבודד משמשים לתפעל DNA עבור יישומים מדעיים שונים והם כלי חשוב עבור טכנולוגיית DNA רקומביננטי. 1) הם משמשים כדי לסייע בהכנסת גנים לתוך וקטורים פלסמיד במהלך שיבוט גנטי ניסויים ייצור חלבון. 2) אנזימים הגבלה יכול לשמש גם כדי להבחין אללים הגן על ידי זיהוי ספציפי שינויים בסיס בודדים ב- DNA. 3) הם משמשים לעכל DNA גנומי לניתוח גנים על ידי כתם הדרומי.
PBR322 הוא פלסמיד שיש שני אתרי הגבלה עבור EcoRI בעוד T4 phage DNA יש שלושה אתרי הגבלה על זה. שני DNA אלה טופלו EcoRI מותר לרוץ על ג'ל agarose. איזה סוג של דפוס יושג על הג'ל?
שאלה לא נכונה, T4 יש סביב 40 אתרים עבור EcoR1, לא 3 ... pBR322 יש רק 1 אתר עבור EcoR1, בין הגן AMP גורם התנגדות הגן TET- ... T4 digests: (תודה, ספרינגר Verlag!) אבל אם השאלה שלך היא היפותטית יותר: הן pBR322 והן T4-genomes הם מעגליים, כך: pBR322: 2cuts = 2 שברים, T4: 3 קיצורים = 3 שברים. ריצה על ג'ל agarose היית רואה 2 להקות ב pBR-ליין, 3 להקות בנתיב T4, אונלאס 2 או יותר שברי הם, או קרוב, גודל שווה. . במקרה זה הם נודדים פחות או יותר באותה מהירות ולא ניתן להבדיל ביניהם. יחסית יחס G / C ל A / T יש השפעה גם .... אז בסופו של דבר, אם את שברי בדוגמה זו היפותטי הם שונים בגודל, 2 להקות pBR, 3 עבור T4 ...
מדוע אנזימי הגבלה חשובים לטביעת אצבע DNA?
אנזימי הגבלה יחתכו מולקולת דנ"א רק בדפוס מסוים של בסיסים. (כפי שצייר) מאחר שלכל האורגניזמים (מתוך זיגוטים עצמאיים) יש DNA ייחודי, אנזימי ההגבלה יחתכו את ה- DNA במקומות שונים ובתדרים שונים. התוצאה היא מספר שונה של "chunks" באורכים משתנים / גדלים. אורך הפיצול אורך פולימורפיזמים (RFLP) הוא ניתוח של שברי מיוצר אנזים הגבלה נתון - את השברים הם טעונים חלקית יגיב שדות חשמליים. האנזים חשוב משום ש"טביעת האצבע "המיוצרת תלויה בגדלים השונים בגודלם של הדנ"א הנחתך, הנוטלים כמויות שונות של זמן כדי לדחוף את השלב הנייד (בדרך כלל ג'ל agarose אם אני לא טועה).