למה GAPDH משמש כתם המערבי? + דוגמה

תשובה:

GAPDH משמש לעתים קרובות כביקורת העמסה.

הסבר:

בשנת המערבי סופג לעתים קרובות אנו משתמשים GAPDH כביקורת טוען. משמעות הדבר היא כי על ידי בדיקה של GAPDH אנו יכולים לבדוק שיש לנו כמויות שוות ערך של חלבונים על נתיבים שונים של הכתם.

דוגמה לשימוש - אומרים שיש לנו מחלה שאנחנו חושבים גורמת עלייה של חלבון מסוים בתא. היינו מייצרים מדגם מתאי "בריאים" ומדגם נוסף מתאים "חולים". היינו מכן לטעון כמויות חלבון שווה של שתי דגימות על גבי ג'ל עבור הכתם המערבי.

לאחר בדיקה של הכתם עבור החלבון שלנו אנו מוצאים כי בתאים החולים כי רמת החלבון אכן מורם (כלומר הלהקה כהה מיוצר על הכתם). כדי להוכיח שעלייה זו בחלבון נובעת משינוי הביטוי בתא, במקום בחומר הטעינה (כלומר, הלהקה יותר אינסטנס נגרמת על ידי שינוי ביטוי החלבון בתאים, ולא על ידי טעינת בטעות יותר של המדגם "מחלה" מאשר "בריא") היינו גם לחקור את הכתם עבור GAPDH להראות כי רמות החלבון הכולל זהים בשני נתיבים.

לפיכך, על ידי כך אנו מראים כי חלבון שווה ערך כבר נטען בשני נתיבים וכי השינוי בעוצמת הלהקה אנו מתבוננים בשל שינויים בביטוי חלבון לחלבון של עניין.