מדוע כתם המערבי משמש לאישור אליסה? + דוגמה

מדוע כתם המערבי משמש לאישור אליסה? + דוגמה
Anonim

תשובה:

בדרך כלל זהו מבחן ספציפיות נוגדן.

הסבר:

ב ELISA קשה מאוד לדעת אם הנוגדנים שלך או מחייב את חלבון של עניין, חלבון שונה לחלוטין, או מגוון של חלבונים.

כתם המערבי ישמש לבדיקת הספציפיות של הנוגדן (יש לציין כי הכתם המערבי לא יכול לזהות את כל תגובות צולבות עם חלבונים לא נכונים).

בכתם המערבי, אתה יכול לראות את גודל החלבון אליו נוגדנים מחייב (אתה לא יכול ב ELISA). לכן, אם הנוגדן שלך צריך להיות מחייב לחלבון של 56 kDa ואתה רואה להקה ב ~ 56 kDa על הכתם אז אתה יכול להיות בטוח באופן סביר כי הנוגדן מחייב את החלבון הנכון.

אם, לעומת זאת, ראיתם להקה ב 32 kDa אתה יכול להסיק כי הנוגדן מחייב את החלבון הלא נכון. כמו כן, אם להקות רבות הופיעו על הכתם המערבי אז זה היה מציע (בהיעדר השפלה חלבון) כי הנוגדן היה מחייב מגוון של חלבונים שונים.

בדוגמה של הלהקה 32 kDa המופיעים על הג 'ל, וגם את הלהקות מרובות, זה היה מציע כי הנוגדן חסר ספציפיות עבור ELISA וכי כל התוצאות לראות ELISA מאי לא להיות ספציפי לחלבון של עניין.

אם הייתי מפעיל את זה סוג של מבחן אני יכול לכלול איזושהי "מפריע" מגיב כדי לבדוק את הנוגדן. לדוגמה, אם הייתי מעלה את הנוגדן שלי פפטיד אני יכול לכלול את הפפטיד בפתרון נוגדן ראשוני כדי לבדוק את הכריכה הנכונה. כלומר, בנוכחות הפפטיד אני לא רואה שום להקה או שום תוצאה של ELISA כמו הנוגדן העיקרי שלי לא יוכל לקשור בשל נוכחות של עודף של הפפטיד.