כיצד מדענים בודדים את הדנ"א כדי ללמוד אותו?

כיצד מדענים בודדים את הדנ"א כדי ללמוד אותו?
Anonim

תשובה:

יש כמה צעדים לעשות את זה, בבקשה להתעלם אנגלית רעה שלי, אני מקווה שאתה עדיין יכול להבין את התהליך.

הסבר:

זה לא קשה כמו שאתה יכול לחשוב.

נניח שאנחנו רוצים לבודד דנ"א מתוך תימוס עגל, אתה צריך לבצע את ההוראות האלה (הם אותו דבר עבור תפוח עד כמה שאני יודע, אבל יש וריאציות זעירות):

  1. קח 3 חתיכות של 3 גרם לחתוך אותו חתיכות זעירות, זעירים ככל האפשר.

  2. שים את זה בבלנדר, עם 75 מ"ל מלוחים נתרן ציטראט (SSC) לכל פיסת ולוודא את הלהב של הבלנדר מכוסה לחלוטין SSC, אז להוסיף חתיכת התימוס אם אתה צריך.

    SSC מוודא קרום התא להיות מומס.

    לשמור על מיזוג עד הכל חלקה.

  3. שים את זה בצינור עבור צנטריפוגה ולקבוע אותו עם צינור אחר כך צנטריפוגה לא נשבר

  4. מניחים את הצינור בצנטריפוגה במשך 20 דקות בסל"ד 5000

  5. כאשר אתה מקבל את הצינורות מתוך צנטריפוגה אתה צריך לראות מחזיקה שני מרכיבים. בתחתית יש חומר מוצק, זה נקרא גלולה וזה מחזיק את גרעיני התא עם ה- DNA. תוכלו גם לראות חומר נוזלי, אשר נקרא supernatant וזה מורכב SSC עם ממברנות התא מומס.

  6. יוצקים את supernatant בתנועת נוזל אחת, זה נקרא decanting וזה משאיר אותך עם גלולה.

  7. שים כמות קטנה של 2.2 Na NaCl בצינור עם גלולה, כך גלולה מכוסה רק NaCl. NaCl גורם חלבונים המקיפים את ה- DNA כדי להאיץ.

  8. מערבבים אותו במבחנה ריק או מוט ערבוב. בסופו של דבר אתה צריך לקבל שני מרכיבים. החלבונים בתחתית ונוזל צמיג על גבי זה.

  9. להוציא את נוזל צמיג עם פיפטה ולוודא שאתה לא לוקח כל חלבונים עם נוזל צמיג. (חתיכות קטנות מאוד של חלבון הם מאוד קשה להימנע, אבל מנסים להימנע כמו חלבונים רבים ככל האפשר)

  10. שים את נוזל צמיג כי אתה pipeted בכוס ולהוסיף 2x כמו אתנול הרבה אליו. אבל להוסיף את אתנול בעדינות כי אתה לא רוצה לערבב את זה עם ה- DNA. בממשק בין אתנול לבין נוזל צמיג אתה צריך לראות בועות DNA מתקרב.

  11. בעדינות לערבב עם מוט זכוכית, ה- DNA הוא טעונה שלילית ולכן זה צריך להיצמד למוט.

  12. שים את זה במבחנה ו להמיס אותו עם SSC.

מכונה מיוחדת יכולה לאחר מכן לספר לך כמה DNA יש לך מבודדים וכיצד הוא טהור.